農(nóng)殘快速檢測

一、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測抽樣技術(shù)

采樣是選取有代表性的果蔬樣品。應(yīng)根據(jù)樣本種類實(shí)際情況確定采樣方法，通常有隨機(jī)法、對角線法、五點(diǎn)法、“Z”形法、“S”形法、棋盤式法、交叉法等。應(yīng)避免采有病、過小或未成熟的樣本。取樣本時(shí)，需在植株各部位 （上、下、內(nèi)、外、向陽和背陰面） 采取。擦去表面泥土或洗凈后待檢測。

1.1采樣的總體原則

“一三五”原則：

“一”即一個(gè)樣品一個(gè)袋子，獨(dú)立包裝；

“三”即茄果瓜類等大果型蔬菜至少采不同地方的三個(gè)；

“五”即葉菜類蔬菜至少采不同地方五棵。

1.2檢測時(shí)要從每棵蔬菜上取樣

具體的取樣

①   葉菜類：青菜、小青菜、菜心、菜莧、米莧、生菜、菠菜、蕹菜、大白菜、杭白菜、黃芽菜、空心菜、娃娃菜、雞毛菜、油麥菜、塔菜、芥蘭、草頭、紫角葉、薺菜、蓬蒿、黃心菜、甘藍(lán)、卷心菜、牛心菜、菊花菜、芹菜、美芹、水芹、黃心芹、香菜、豆苗、金絲芥、
芥菜、馬蘭、韭菜、韭黃、大蔥、小蔥、大蒜、蒜苗、洋蔥等

葉菜類取1克樣品時(shí)，不易太碎，以葉為主。蔥蒜等特殊菜注意假陽性，樣品比對是用標(biāo)準(zhǔn)對照庫。

② 花菜類：花菜、白花菜、青花菜等

花菜類選取3棵樣品，取葉1克（1厘米長寬，不要剪的太碎）。

③ 果菜類：茄子、番茄、青茄、紅茄、辣椒、尖椒、甜椒、杭椒、青椒、黃瓜、西葫蘆、冬瓜、瓠瓜、苦瓜、絲瓜、南瓜、節(jié)瓜、金瓜、佛手瓜、豇豆、刀豆、蕓豆、扁豆、白扁豆、毛豆、蠶豆、豌豆、荷蘭豆等

果菜類可以采取順皮削取1克的方法。具體用帶刮皮器的水果刀順皮削下一片，然后切成1厘米左右見方碎片。

④ 食用菌：蘑菇、香菇、平菇、袖珍菇、金針菇、茶樹菇等

食用菌類可以采取整株浸泡的方法。

二、GB/T5009.199-2003《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量快速檢測》檢測過程的關(guān)鍵控制點(diǎn)。

2.1標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施的必要性

我國是農(nóng)藥使用的*大國（年使用量100萬噸以上），由農(nóng)藥殘留引起的食物中毒事故屢有發(fā)生，這主要分為在蔬菜、瓜果上使用高毒農(nóng)藥后，短時(shí)間內(nèi)采摘和食用所引起的急性中毒事故和農(nóng)藥殘留量超過zui高允許*（MRL值），長期食用引起的慢性中毒兩種。由于農(nóng)藥品種結(jié)構(gòu)不合理，加上一些人為不合理的使用，以及農(nóng)藥殘留監(jiān)管力度不夠，致使我國農(nóng)藥殘留問題比較突出。

農(nóng)殘超標(biāo)的主要原因：一是生產(chǎn)者不嚴(yán)格按農(nóng)藥安全使用準(zhǔn)則的要求進(jìn)行生產(chǎn),使用違禁農(nóng)藥或使用量和安全期掌握不好。二是施藥器具噴灑的均勻性欠佳,易導(dǎo)致局部給藥超量所致。

由于高毒、高殘留的有機(jī)磷農(nóng)藥如：對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧樂果、敵敵畏及甲胺磷等占據(jù)了殺蟲劑產(chǎn)量的70％以上，并且其中70％以上的中毒事故都是由有機(jī)磷農(nóng)藥引起的。

2.2標(biāo)準(zhǔn)操作的可行性

酶抑制法是研究zui多且相對成熟的一種對部分農(nóng)藥進(jìn)行殘留快速檢測技術(shù)。酶抑制法是利用有機(jī)磷與氨基甲酸酯類農(nóng)藥可特異性地抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶（AChE）的活性，破壞神經(jīng)的正常傳導(dǎo)，使昆蟲中毒致死這一毒理學(xué)原理，將AChE與樣品反應(yīng)，根據(jù)AChE活性受到抑制的情況，可判斷出樣品中是否含有有機(jī)磷與氨基甲酸酯類農(nóng)藥。為了提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度，將提取液用比色法進(jìn)行分析，從而研制出各種農(nóng)藥殘留快速檢測儀。殘留農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶活性有抑制，濃度越高，抑制率越高。儀器通過測定酶與底物、顯色劑顯色反應(yīng)變色速率，并與空白對照比較求得酶抑制率，從而判定農(nóng)藥殘留量是否超標(biāo)。

2.3標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施的作用與意義

蔬菜中的水份、碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂等物質(zhì)不會對農(nóng)藥殘留物的檢測造成干擾，不必進(jìn)行分離去雜，節(jié)省了大量預(yù)處理時(shí)間，從而能達(dá)到快速檢測的目的。因此該方法既具有快速方便、前處理簡單、又無需專業(yè)儀器（設(shè)備相對簡單），適用于現(xiàn)場的定性和半定量測定。

此標(biāo)準(zhǔn)操作簡便、易行、成本低、前期投入少，適合生產(chǎn)基地、市場、超市等進(jìn)行市場準(zhǔn)入和產(chǎn)地準(zhǔn)出農(nóng)藥殘留初篩快速批量檢測。通過采用現(xiàn)場快速初篩檢測和實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證性檢測結(jié)合，對結(jié)果陽性的樣品用準(zhǔn)確、可靠的色譜法進(jìn)行驗(yàn)證，可大大減少分析工作量，提高分析效率，有利于加強(qiáng)農(nóng)藥殘留監(jiān)控的力度。

2.4檢測過程的關(guān)鍵控制點(diǎn)

① 檢測過程中溫度與提取時(shí)間對結(jié)果的影響

以大米為樣品，通過檢測不同溫度、不同提取時(shí)間，所得到的抑制率來選擇，所得結(jié)果見圖1和圖2。從圖中可見，樣品的提取溫度在10-30℃范圍抑制率變化較小，高于30℃時(shí)抑制率有所降低，而靜置制備樣品提取時(shí)間達(dá)6分鐘后，抑制率不再增加。

圖.1不同提取溫度對抑制率的影響曲線

圖.2不同提取時(shí)間對抑制率的影響曲線

② 關(guān)鍵點(diǎn)假陽性的控制

假陽性的產(chǎn)生：一方面，由于各蔬菜品種間（如：蔥蒜類、香菜、韭菜等容易出現(xiàn)假陽性的蔬菜）對檢測抑制率有不同干擾和影響，使一般的快速檢測方法難以區(qū)分與農(nóng)殘抑制作用的比例關(guān)系容易造成誤判（假陽性）；另一方面，因色素的干擾可能影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。當(dāng)待測樣品的色素（如：葉綠素、胡蘿卜素等）含量較高時(shí)，會使測得的透過率非常低，從而造成對吸光度隨時(shí)間變化值計(jì)算的錯誤，影響檢測結(jié)果的可靠性。

《果蔬農(nóng)藥殘留比對數(shù)據(jù)庫》：2004年，上海博納新技術(shù)研究所與農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督和檢測中心（北京）及中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥殘留與環(huán)境毒理教研室共同合作，依據(jù)GB/T5009.199-2003的標(biāo)準(zhǔn)，在CL-BⅢ農(nóng)殘快速測定儀的基礎(chǔ)上成功研發(fā)了《果蔬農(nóng)藥殘留比對數(shù)據(jù)庫》，初步解決了應(yīng)用“酶抑制率法+分光光度法”檢測有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留時(shí)存在的部分“檢測盲區(qū)”，在一定程度上避免了檢測結(jié)果的假陽性，并實(shí)現(xiàn)了檢測過程中對吸收光譜的自動校準(zhǔn)。利用這一科研成果，可使非專業(yè)人員能較快掌握相應(yīng)的操作技能，從而達(dá)到復(fù)雜原理與簡易操作的有機(jī)統(tǒng)一。

如何處理和避免假陽性？

A．由于果蔬細(xì)胞液中存在有抑制膽堿酯酶的物質(zhì)，在檢測取樣時(shí)，不要將果蔬樣品切的太碎，以免果蔬細(xì)胞液流入檢測液中，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

B．大多果蔬由于剪得太碎，或浸提時(shí)間過長，使得提取的樣品溶液中，含有較多葉綠素，干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

C．韭菜、生姜、蔥、辣椒、胡蘿卜等蔬菜中，含有破壞酶活性的物質(zhì)，處理這類樣品時(shí)，必要時(shí)可采取整株蔬菜浸提。

D．用CL-BⅢ殘留農(nóng)藥測定儀的軟件中，“保存對照”和“裝入對照”的功能，我們能分別建立相應(yīng)果蔬品種的空白對照庫。并能用相應(yīng)果蔬品種的空白對照同該果蔬品種的樣品進(jìn)行測定。這樣就有可能對如：韭菜、生姜、蔥、辣椒、胡蘿卜等蔬菜進(jìn)行更好地檢測。

現(xiàn)階段，我國農(nóng)業(yè)上有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的種類有一百多種，質(zhì)量和品種很雜，不宜用氣相色譜方法逐一查出。用CL-BⅢ殘留農(nóng)藥測定儀，能較好地避免假陽性，把好質(zhì)量關(guān)。

三、上海博納農(nóng)藥速測儀的使用注意事項(xiàng)和故障排除。

3.1儀器的維護(hù)、保養(yǎng)

① 存放儀器的地方必須保持干燥、防塵、防振動。

② 儀器內(nèi)部通道應(yīng)保持干凈，無灰塵，若有污物，可用棉質(zhì)物拭凈。

③ 儀器操作時(shí)，必須注意比色皿通光面不能受到手指或油跡等污染，如有污物或液體可用過濾紙檫凈。

④ 儀器所配套的各個(gè)檢測項(xiàng)目所需的輔助設(shè)備、檢測試劑和檢測用品器具。每次檢測完畢后，應(yīng)注意進(jìn)行維護(hù)和保管。

⑤ 禁止在儀器DC輸入孔插入非本公司配套的其他電源。

⑥ 儀器使用前必須先仔細(xì)閱讀儀器使用說明書，根據(jù)說明書上的操作步驟進(jìn)行操作。如儀器出現(xiàn)不正?，F(xiàn)象時(shí)，應(yīng)通知銷售商或送到特約維修點(diǎn)維修。用戶不得自行拆卸修理，否則將影響銷售商按照儀器維修條款提供服務(wù)。

3.2常見問題及解決方法

1．儀器開機(jī)，為什么液晶屏不亮？

解決方法：檢查電壓如果高于220V，則儀器及其穩(wěn)壓電源可能被燒壞，請更換穩(wěn)壓電源；若更換穩(wěn)壓電源后，仍然無法開機(jī)，請將儀器寄送回我公司修理。

2．聯(lián)機(jī)操作調(diào)0/100時(shí)，無紅線，軟件為何顯示“沒有檢查到的設(shè)備，請檢查儀器連接”？

解決方法：首先檢查儀器與電腦間的數(shù)據(jù)線是否連接好。若連接正常，請檢查儀器是否調(diào)整為“受控工作模式”，然后在食品質(zhì)量安全檢測軟件中的設(shè)備設(shè)置中，選擇相應(yīng)的儀器型號。如果還是不行，則換一臺電腦試試，有可能是電腦的串口出故障。

3．在調(diào)0和100后為何會出現(xiàn)“您調(diào)0/100有誤”，出現(xiàn)800或是更高的紅線？

解決方法：確認(rèn)是否在調(diào)0時(shí)放入黑塊，黑塊拿出時(shí)調(diào)100；另外不要在0到100或是100到0的變化過程中，按下0/100鍵。

4．調(diào)0/100時(shí)，按下0鍵，或100鍵后，紅線為什么不馬上變?yōu)?span lang="EN-US">0或100？

解決方法：這種現(xiàn)象是正常的，要在調(diào)0/100按“結(jié)束分析”鍵后，重新點(diǎn)擊“開始對照分析”鍵，才會看到0線和100線的數(shù)值變?yōu)?span lang="EN-US">0或100。

5．調(diào)0/100時(shí)，數(shù)據(jù)曲線總是為0或其數(shù)值總是在上下飄動，無法穩(wěn)定，是怎么回事？

解決方法：儀器與電腦的數(shù)據(jù)采集線是否連接好；正常聯(lián)接排除后有可能是比色池中的燈泡老化，需要更換燈泡。

6．在使用移液槍時(shí)要注意哪些問題？

A．在加入不同的試劑時(shí)，一定要用不同的槍頭。

B．在取出試劑后，要檢查槍頭內(nèi)的試劑有無氣泡。

C．在向試管內(nèi)加入試劑時(shí)，要保證槍頭與液面垂直,并將試劑全部加入溶液中，而沒有在留在試管壁上。

7．為什么在*檢測儀中做完對照后，在第二檢測儀中做不出樣品測試，總是讓重做對照測試？

解決方法：檢查其它通道中是否裝入對照樣例，點(diǎn)擊“ ”，選擇相應(yīng)通道，點(diǎn)擊“讀取”。

8．為什么做空白對照時(shí)紅線的起始值很低？

解決方法：在做標(biāo)準(zhǔn)溶液配置時(shí)，加完底物后晃動試管并將溶液倒入比色皿后快速放入比色池，不要過很長時(shí)間后再放。檢查比色皿是否由于清潔而影響其透光率，更換新的比色皿或者把不干凈的比色皿放到酒精中浸泡4-5小時(shí)，然后用棉球?qū)⑵洳潦酶蓛簟?span lang="EN-US">

9．怎樣的對照才是正常的對照？

解決方法：一般看對照的差值，檢測的時(shí)間為3分鐘，則差值應(yīng)該大于8，如果差值偏小達(dá)不到要求，則表明試劑中有一樣或幾樣過期，無法使用。

10．如果試劑過期，如何判斷是什么試劑過期？

此問題分幾種情況

A．當(dāng)對照結(jié)束后，對照溶液的顏色沒有什么變化，則表明有可能是酶試劑過期。

B．當(dāng)加入底物后，對照溶液一下子變?yōu)樯铧S色，則表明有可能是底物過期。

C．如果換過一瓶新酶，依然出現(xiàn)A中的現(xiàn)象，則有可能是顯色劑過期。

11．為什么要使用標(biāo)樣庫及如何正確使用。

每種蔬菜都有自己特殊的一種化合物，該化合物對酶的作用和農(nóng)藥對酶的作用是類似的，即：會抑制酶的活性。有些蔬菜本身對酶的活性的抑制作用比較強(qiáng)，而有些則較弱。在所有的蔬菜中有刺激性氣味的蔬菜對酶活性的抑制作用是比較強(qiáng)的，為來更好的消除這種來自蔬菜本身的影響，上海博納新技術(shù)研究所和中國農(nóng)大合作開發(fā)來該標(biāo)準(zhǔn)對照庫，也是全國*一家有此對照庫的廠家。

A．做一標(biāo)準(zhǔn)的空白對照，并且進(jìn)行保存。

B．按“裝入對照樣例”鍵，打開對照數(shù)據(jù)庫，在選擇“標(biāo)準(zhǔn)對照庫”。

C．在對照上半部分選擇當(dāng)天做的空白對照。

D．在對照庫下半部分選擇所做蔬菜的修正對照。

E．在對照庫的右上角出選擇所要用的通道，并在通道號前打“√”。

F．在對照庫的右下角處按“讀取”鍵完成轉(zhuǎn)入工作。

12．為什么做樣品分析時(shí)會出現(xiàn)“采樣點(diǎn)透過率太小”？

解決方法：檢查是否在做樣品分析的時(shí)，加入底物后時(shí)間過的較長才進(jìn)行樣品分析。是否樣品本身的沉淀物和雜質(zhì)含量較多，樣品本身的色素干擾作用，是否品種為假陽性——用濾紙或其他方式進(jìn)行過濾，在“系統(tǒng)設(shè)置”菜單中選種“自動修正色素干擾的檢測結(jié)果”，選擇樣品比對庫。

13．樣品檢測值為何總是偏大？

此問題有數(shù)種可能，請分別檢查下面的步驟是否正確：

A．沒有做空白對照，或用來以前的空白對照。

B．在做樣品溶液時(shí)，菜葉剪得太碎，以至于檢測液顏色較深。建議菜葉大小為1厘米見方。

C．檢測液中有懸浮物或渾濁物，使光線無法正常通過比色皿，建議過濾后再檢測。

D．試劑加入的順序錯誤，或漏加某個(gè)試劑。試劑加入的順序一定是：酶，顯色劑，底物。

E．比色皿污濁或放入方位錯誤，使光線無法通過比色皿。

F．比色皿外表有水滴使樣品曲線不正常。

14．樣品檢測值為何總是偏小。

此問題有數(shù)個(gè)可能，請分別檢查下面的步驟是否正確：

A．沒有調(diào)0和100。

B．制作樣品檢測液時(shí)，靜止等待的時(shí)間不夠15分鐘。

C．加入酶和顯色劑后等待的時(shí)間不夠15分鐘。

15．為什么在做完樣品測試后，電腦沒有直接跳出檢測結(jié)果？

解決方法：“系統(tǒng)設(shè)置”菜單中不要選種的“檢測完成后自動保存檢測結(jié)果”，如選種，檢測結(jié)果就需要在“統(tǒng)計(jì)匯總”菜單下的“自動保存檢測數(shù)據(jù)”一欄查看。

16．為什么在數(shù)據(jù)保存時(shí)會出現(xiàn)“無法修復(fù)與壓縮數(shù)據(jù)”？

解決方法：由于數(shù)據(jù)庫文件出現(xiàn)損壞，需要重新安裝軟件。平時(shí)在做數(shù)據(jù)的過程中盡量多進(jìn)行備份，以免數(shù)據(jù)丟失。

17．為什么會出現(xiàn)“本機(jī)時(shí)間快于服務(wù)器時(shí)間”，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)無法上傳？

解決方法：把電腦的時(shí)間調(diào)整到服務(wù)器時(shí)間之后，重新進(jìn)行上傳。